أدوات رد الفعل لتوليف المرحلة الصلبة الببتيد

ما هو الببتيد؟

Polypeptide هو مادة نشطة بيولوجيا ترتبط بوظائف الخلايا المختلفة في الكائن الحي. بنيته الجزيئية بين الأحماض الأمينية والبروتينات. إنه مركب يتكون من مجموعة متنوعة من الأحماض الأمينية مجتمعة بواسطة روابط الببتيد بترتيب معين. Polypeptide هو مصطلح عام للمواد النشطة بيولوجيا التي تنطوي على وظائف خلوية مختلفة في الكائنات الحية ، وغالبًا ما تستخدم في التحليل الوظيفي ، وأبحاث الأجسام المضادة ، وخاصة تطوير الأدوية وغيرها من المجالات.

المبادئ الأساسية لتوليف المرحلة الصلبة الببتيد

أولاً ، ترتبط مجموعة الهيدروكسي للحمض الأميني الطرفي الهيدروكسي لسلسلة الببتيد المراد تصنيعها براتنج بوليمر غير قابل للذوبان في بنية رابطة تساهمية ، ثم يتم استخدام الحمض الأميني المرتبط بحامل الطور الصلب كمكون أميني لـ قم بإزالة مجموعة الحماية الأمينية واتصل بنفس. كرر العملية (التكثيف ← الغسيل ← نزع الحماية ← التحييد والغسيل ← الجولة التالية من التكثيف) للوصول إلى طول سلسلة الببتيد المراد تصنيعها. أخيرًا ، يتم شق سلسلة الببتيد من الراتنج وتنقيتها للحصول على البولي ببتيد المطلوب. تسمى مجموعة α-amino المحمية بواسطة BOC (ثلاثي بوتوكسي كاربونيل) طريقة تخليق المرحلة الصلبة BOC ، وتسمى مجموعة α-amino المحمية بـ FMOC (9-fluorenemethoxycarbonyl) طريقة التوليف ذات المرحلة الصلبة FMOC.

عملية تخليق عديد الببتيد

ج: اختيار الراتنج وتثبيت الأحماض الأمينية

هناك ثلاثة أنواع رئيسية من ناقلات البوليمر المستخدمة في تصنيع البولي ببتيد: البوليسترين المتقاطع والبولي أميد وراتنجات البولي إيثيلين جليكول الدهنية. يتحقق تجميد الأحماض الأمينية بشكل أساسي عن طريق تكوين روابط تساهمية بين مجموعات الكربوكسيل للأحماض الأمينية المحمية والمجموعات التفاعلية للراتنج.

ب: حماية وإزالة المجموعة الأمينية ومجموعة الكربوكسيل والسلسلة الجانبية

لتجميع بولي ببتيد بنجاح مع تسلسل حمض أميني محدد ، من الضروري حماية مجموعات الأمينية والكربوكسيل التي لا تشارك في تكوين روابط الأميد ، وفي نفس الوقت حماية المجموعة النشطة على سلسلة الأحماض الأمينية الجانبية ، و قم بإزالة المجموعة الواقية بعد اكتمال التفاعل. في السنوات الأخيرة ، تم استخدام طريقة التوليف FMOC على نطاق واسع. عادة ما يتم حماية مجموعات الكربوكسيل عن طريق تكوين مجموعات الإستر. استرات الميثيل والإيثيل هي طرق شائعة لحماية مجموعات الكربوكسيل في التوليف التدريجي.

ج: تفاعل تشكيل الببتيد

عادة ما يكون تفاعل تشكيل الببتيد في المرحلة الصلبة هو وضع اثنين من الأحماض الأمينية المتوافقة المحمية أمينيًا والمحمية بالكربوكسيل في محلول دون تكوين رابطة ببتيدية. لتكوين رابطة أميد ، تتمثل الطريقة الشائعة الاستخدام في تنشيط مجموعة الكربوكسيل لتصبح رابطة الأميد تتشكل عن طريق خلط أنهيدريد حامض ، أو استرات نشطة ، أو كلوريدات الحمض أو تكوين أنهيدريدات حمض متناظرة مع عامل تكثيف قوي (مثل كربوديميد).

D: انشقاق وتنقية سلاسل الببتيد الاصطناعية

تستخدم طريقة BOC TFA + HF لتشق وإزالة مجموعة حماية السلسلة الجانبية ، وتستخدم طريقة FMOC TFA مباشرة. عادةً ما يتم إجراء مزيد من التنقية والفصل والتنقية لسلاسل الببتيد الاصطناعية بواسطة كروماتوغرافيا سائلة وكروماتوغرافيا تقارب ورحلان كهربي شعري وما شابه.

ما هي أدوات التفاعل لتخليق المرحلة الصلبة الببتيد؟

عملية تصنيع الببتيدات في المرحلة الصلبة معقدة للغاية وتتطلب مراقبة حدسية من قبل المشغلين. في الوقت نفسه ، يمكن إجراء القطع عبر الإنترنت بعد التوليف (كاشف القطع TFA تآكل للغاية). هذه المتطلبات تحد من مادة المفاعل. يستخدم المفاعل الزجاجي من قبل العديد من خبراء الكيمياء والبيولوجيا بسبب خصائصه الشفافة تمامًا والمقاومة للتآكل.

مع تطور تكنولوجيا تصنيع المرحلة الصلبة الببتيدية وتحسين مقاومة التآكل لمواد الفولاذ المقاوم للصدأ ، تم أيضًا استخدام مفاعل 316 من الفولاذ المقاوم للصدأ تدريجيًا في مفاعل المختبر الرئيسي ، ولديه موصلية حرارية أفضل من الزجاج ، مع تجنب خصائص الزجاج الهش .

بالنسبة للتشغيل الفعلي ، تعتمد كيفية الاختيار بين الزجاج والفولاذ المقاوم للصدأ على أغراض الاختبار المختلفة أو احتياجات الإنتاج.