I. التشغيل: إنشاء بيئة لاهوائية
1. ضبط ضغط مخرج أسطوانات النيتروجين والغازات المركبة: اضبط صمام تخفيض الضغط على حوالي 0.1 ميجا باسكال.
2. شغّل مفتاح الطاقة وجهاز التحكم في درجة الحرارة، واضبط درجة الحرارة المطلوبة. يمكن اختيار درجة الحرارة داخل الحاضنة في حجرة التشغيل والتحكم بها حسب الحاجة.
3. ضع الملحقات والمعدات اللازمة وفقًا لمتطلبات الاستخدام، وضع كيسين بلاستيكيين غير سامين داخل حجرة التشغيل.
4. ضع ١٠٠٠ غرام من حبيبات البلاديوم المجففة (مغلقة) و٥٠٠ غرام من مادة مجففة، بالإضافة إلى مؤشر اللاهوائية (مغلق)، في حجرة التشغيل.
5. أغلق البابين الداخلي والخارجي لحجرة أخذ العينات بإحكام، ثم تحقق من وجود فراغ.
6. استبدال النيتروجين الثانوي في حجرة التشغيل:
(1) أدخل أنبوبًا مطاطيًا في مدخل الهواء لحجرة التشغيل، وأدخل الطرف الآخر في كيس بلاستيكي.
(2) وصّل مدخل النيتروجين، وافتح صمام التحكم بالنيتروجين، واملأ الكيسين البلاستيكيين بالنيتروجين، ثم اربط فتحتي الكيسين بإحكام.
(3) ضع قفازات مطاطية على حلقة التثبيت الخاصة بلوحة المراقبة، واربطها بإحكام.
(4) أطلق النيتروجين تدريجيًا من الأكياس البلاستيكية إلى حجرة التشغيل حتى يتم إطلاق كل النيتروجين.
7. استبدال النيتروجين الثانوي في حجرة التشغيل: كرر عملية تعبئة النيتروجين، مع الحرص على فتح وإغلاق صمام العادم باستمرار.
8. استبدال الغاز المختلط الثالثي في حجرة التشغيل:
(نسبة الغاز المختلط: نيتروجين ٩٠٪؛ هيدروجين ٥٪؛ ثاني أكسيد الكربون ٥٪).
(1) غيّر مسار الغاز، وافتح صمام مدخل الغاز المختلط، وافتح وأغلق صمام العادم باستمرار أثناء التعبئة.
(2) بعد امتلاء الكيس البلاستيكي بمزيج الغاز، أغلق صمام التدفق المباشر لمزيج الغاز (صمام ثلاثي الاتجاهات).
(3) أطلق مزيج الغاز تدريجيًا من الكيس البلاستيكي إلى غرفة العمليات.
(4) بعد ثلاث عمليات تبادل للهواء، انخفض محتوى الأكسجين في غرفة العمليات إلى كميات ضئيلة.
9. شغّل جهاز امتصاص الأكسجين بحبيبات البلاديوم في حجرة التشغيل، ووصل مصدر الطاقة بجهاز إزالة الأكسجين التحفيزي. بعد ساعة، راقب تغير لون شريط مؤشر اللاهوائية. يشير تغير اللون إلى أن حجرة التشغيل قد وصلت إلى بيئة لاهوائية.
10.قم بتشغيل مصابيح التعقيم بالأشعة فوق البنفسجية وعقم الغرفة. مدة التعقيم متروكة لك.
II.تلقيح وزراعة الكائنات الدقيقة
1.تأكد من إحكام إغلاق باب حجرة أخذ العينات.
2.افتح الباب الخارجي لحجرة أخذ العينات، وضع مزرعة البكتيريا داخلها، ثم أغلق الباب الخارجي.
3.قم باستبدال النيتروجين في حجرة أخذ العينات ثلاث مرات: أولًا، قم بتفريغ الهواء إلى مستوى ٥٠٠ مم زئبق (٦٦ كيلو باسكال) أو أعلى، ثم افتح صمام النيتروجين يدويًا للسماح بدخول الهواء، وكرر العملية بعد عودة المؤشر إلى الصفر.
4.في حال اختيار مستوى تفريغ أقل، يجب زيادة عدد دورات الاستبدال.
5.بعد فتح وإغلاق باب حجرة أخذ العينات، قم بتفريغ الهواء إلى مستوى منخفض ١٠٠ مم زئبق (١٣ كيلو باسكال) للفحص والمساعدة في التشغيل.
6.شروط الاستخدام المستمر طويل الأمد للحاضنة اللاهوائية:
(1)راقب شريط مؤشر اللاهوائية في غرفة العمليات يوميًا. إذا كانت القراءة طبيعية، يمكن الاستمرار في استخدام الغرفة. أما إذا كانت القراءة غير طبيعية، فيجب استبدال الهواء.
(2) يجب إدخال كمية صغيرة من الغاز المختلط بشكل مستمر لفترة طويلة لضمان اتحاد الهيدروجين المضاف مع كميات ضئيلة من الأكسجين لامتصاصه تحفيزيًا، وبالتالي الحفاظ على حالة اللاهوائية في الغرفة. يجب أن يكون معدل تدفق الغاز المختلط المضاف حوالي 10 مل في الدقيقة.
(3) استبدل مادة التجفيف بعد 3 أيام من الزراعة المستمرة.
7.طريقة استخدام جهاز تعقيم قضيب التلقيح:
(1) استخدم سلك تسخين من النيكل والكروم لتوصيل قضيب التلقيح وتسخينه في أي وقت لتعقيمه.
(2) ضع قضيب التلقيح مباشرةً على نقطة انصهار الشمع وقم بتدويره لإذابة الشمع عند نقطة إغلاق أنبوب الاختبار.