1. تدفق الكشف عن الصك
أول شيء يجب مراعاته هو عدد المرات التي يحتاج فيها المختبر إلى استخدام أداة PCR الكمية. اختبر ديفيد جينزينجر ، رئيس معدات تحليل الجينوم في جامعة كاليفورنيا ، مركز سان فرانسيسكو للسرطان ، معظم آلات PCR الكمية في السوق. وقال إنه إذا لم يتم استخدامه على نطاق واسع ، على سبيل المثال ، فإنه يستخدم بشكل أساسي لاختبار الجينات المعروفة ، فإنه لا يحتاج إلى منتجات عالية التكلفة باهظة الثمن. ولكن بالنسبة لتلك المختبرات التي تحتاج إلى إيجاد أهداف دوائية جديدة وعلامات المرض ، فإنها تحتاج إلى أدوات يمكنها استيعاب 384 لوحة جيدة وتشغيلها بشكل أسرع. ومع ذلك ، فإن هذه الأداة عالية الإنتاجية ليست سريعة بما يكفي ، وستجد أن إعداد العينة يصبح عنق الزجاجة للحد من المعدل. لذلك ، غالبًا ما تتطلب المختبرات ذات الإنتاجية العالية أدوات آلية أخرى ، وطالما تم الضغط على الزر ، ستقوم الأداة بمعالجة العينات تلقائيًا ، وتنقية الأحماض النووية ، وإعداد قوالب PCR.
2. قدرة التضخيم المتعدد
التضخيم المتعدد يزداد سخونة. معدات PCR الكمية الكمية في الوقت الحقيقي ليست محصنة. تحتوي أداة PCR الكمية الكمية على قنوات كشف متعددة ، لذلك يمكن للأداة اكتشاف عملية تضخيم قوالب متعددة في نفس خزان العينة. يحتوي LightCycler2.0 الجديد على 6 قنوات كشف ، 3 أكثر من الأصلي. لدى SmartCyclerⅡ 4 قنوات كشف. Stratagene ، المشهورة بمنتجات مكتبتها ، لديها أيضًا أداة PCR الكمية Mx3000P بأقل من نصف سعر Roche وسمعة جيدة ، أي 4 قنوات للكشف. ومع ذلك ، فإن التضخيم المتعدد غير مناسب للجميع لأنه يعقد التجربة.
3. البرمجيات
عندما تكون مستعدًا لاختيار أداة PCR الكمية ، يجب عليك التحقق من البرنامج المرفق. هل هو مناسب للاستخدام ، هل يمكنك إجراء التحليل الذي تحتاجه ، وهناك العديد من تنسيقات الإخراج. ومع ذلك ، تحتاج إلى الانتباه إلى ما إذا كان البرنامج سهل الاستخدام للغاية بسيطًا نسبيًا في وظيفته ولا يمكنه إجراء عمليات حسابية معقدة. يتطلب البرنامج السابق منك إجراء مزيد من التحليل. يمكن للبرنامج الجديد بالفعل معالجة كل شيء. بالإضافة إلى الوظائف الأساسية ، يمكن أن تحتوي بعض البرامج أيضًا على المزيد من الوظائف ، مثل تصميم التمهيدي والمسبار وتصميم التحليل المتعدد وتصحيح الخلفية وتطبيع البيانات وما إلى ذلك. أكد ويليان ديميان ، رئيس قسم التطبيقات والخدمات الفنية بقسم العلوم التطبيقية في شركة روش ، على أن PCR الكمي هو عملية تضخيم هندسي ، وفي البداية ، هناك اختلاف في النسخ ، وتختلف النتائج حسب الترتيب الهندسي.
4. المرونة
من المؤكد أن معدات المختبرات المشغولة الكبيرة تُحسد عليها ، ويمكن للمختبرات التقليدية أيضًا أن تكون لها خيارات رائعة. لدى الموردين الحاليين العديد من الخبراء التقنيين ، ليس فقط لفهم احتياجاتك الحالية ، ولكن أيضًا مدروسًا للغاية بالنسبة لك للنظر في تغييرات الطلب المحتملة في المستقبل ، مثل توفير مجموعة متنوعة من الملحقات والوحدات القابلة للترقية. يمكن لـ MyCycler من BioRad تحديد الوحدات والترقية إلى القياس الكمي في الوقت الفعلي. تحتوي أداة PCR الكمية من ABI على مجموعة متنوعة من خزانات العينات المختلفة ، والتي يمكنها تغيير خزانات 96 بئر إلى خزانات بئر 384 مزدوجة لتلبية بعض متطلبات الإنتاجية العالية. بالنسبة للمختبرات التي بدأت للتو في إجراء qPCR بكميات صغيرة ، تعد أداة SmartCycler II PCR الكمية خيارًا جيدًا ، حيث تشتمل الوحدة الأساسية على 16 خزانًا مستقلًا للتحكم في درجة الحرارة ، ويمكن إجراء 16 تجربة مختلفة مستقلة تمامًا في نفس الوقت أو قبل وبعد. "الوصول" ؛ عندما يحتاج المختبر إلى تجربة واسعة النطاق ، يمكن ترقيته اقتصاديًا للغاية ، من 1 إلى 6 وحدات أساسية ، وهي 96 عينة من الآبار. على الرغم من أنه لا يمكن استخدام 96 لوحة جيدة ، عندما يبدأ الطالب كمية صغيرة من التجارب ، يمكن للآخرين أيضًا التوصيل في أي وقت لبدء تجاربهم المستقلة الخاصة ، ولا يتداخلون مع بعضهم البعض ، مما يزيد من المرونة. إنه خيار مرن للغاية للمختبرات التي لديها عدد قليل فقط من التجارب ولديها ميزانية محدودة في البداية.
5. عدم اليقين
على الرغم من أنه يمكن تصحيح البرنامج جزئيًا ، إلا أنه من الأفضل شراء أداة بها أخطاء أقل منهجية دون الحاجة إلى العديد من تصحيحات الحساب عن طريق الحساب. يعتقد Cinzinger أنه يجب إيلاء اهتمام خاص للاختلافات بين عينة آبار الصك. بالإضافة إلى الاختلافات المعروفة في درجات الحرارة بين ثقوب العينة ، هناك أيضًا اختلافات صغيرة في مسافة المسار البصري بين فتحة العينة ومسبار الكشف ، والاختلاف الطفيف في طول الألياف المسؤولة عن إرسال واستقبال وإرسال الإشارات ، والفرق الصغير في المسافة والزاوية بين العدسة وفتحة العينة ، وحتى تأثير خلية العينة على نقل الإشارات. قام سينزينجر بنفس الاختبار على معظم أجهزة PCR الكمية المتاحة تجاريًا ، حيث يضخم نفس العينات والكواشف في الوقت الفعلي في كل بئر من الجهاز. لسوء الحظ ، في كثير من الأحيان ، ستكون هناك نتائج مختلفة بين عينات آبار مختلفة.
6. اختيار مجموعات
على الرغم من أن موظفي المبيعات سيفتخرون بمجموعات مراقبة الجودة الممتازة والحلول ستحصل على نتائج فردية ، ولكن شراء مجموعات جاهزة ليس حلاً للاختلافات. تجارب التقييم الجادة والتجارب التحليلية هي الحلول.