I: ما هي قارورة زراعة الخلايا؟
قارورة زراعة الخلايا هي أداة مخبرية شائعة الاستخدام في زراعة الخلايا. وهي مصنوعة من مادة البوليسترين (PS) عالية الجودة، باستخدام قوالب فائقة الدقة وعمليات إنتاج آلية بالكامل. تُستخدم في زراعة الخلايا المخبرية، وتُسهّل خصائصها البصرية الممتازة الملاحظة المجهرية، كما يُعالج سطحها بمادة TC لتحسين التصاق الخلايا.
II: تلقيح معلق الخلايا في قارورة الزراعة
1. خلط معلق الخلايا: حضّر معلق الخلايا وفقًا للتركيز التجريبي المطلوب، واخلطه جيدًا في قارورة زراعة أو وعاء زراعة أو أي وعاء آخر.
2. استخدم ماصة أو ماصة باستور لحقن معلق الخلايا ببطء وثبات في قارورة زراعة الخلايا، مع تجنب تناثر المحلول أو تكوّن الرغوة. (في حالة قوارير زراعة الخلايا متعددة الطبقات، انتبه جيدًا لتوزيع السائل بالتساوي؛ إذ يُمكن إمالة القارورة أو تدويرها لضمان تدفق متساوٍ في كل طبقة).
3. ضع قارورة الزراعة برفق على سطح عمل ثابت، مع التأكد من أن الجانب الأملس والمسطح متجه للأعلى والجانب المتدرج متجه للأسفل (تصميم قابل للتكديس لسهولة الاستخدام).
4. ضع قارورة زراعة الخلايا في حاضنة مناسبة، واضبط درجة الحرارة المناسبة (مثل ٣٧ درجة مئوية)، والرطوبة، وتركيز الغاز (مثل ٥٪ ثاني أكسيد الكربون).
5. اترك الخلايا تنمو في قارورة الزراعة لفترة زمنية محددة.
III: تغيير وسط الاستنبات
1. إزالة وسط الاستنبات القديم: عند شفط وسط الاستنبات، قم بإمالة القارورة بزاوية 45 درجة مع توجيه الجانب الأملس نحوك. اسحب وسط الاستنبات القديم برفق باستخدام ماصة باستور أو ماصة عادية، مع الحرص على عدم إزالة الخلايا الملتصقة. في حال وجود عدد كبير من الخلايا العالقة أو الشوائب في وسط الاستنبات، اغسل الخلايا مرة أو مرتين بمحلول فوسفات ملحي (PBS) لإزالة هذه الشوائب.
2. إضافة وسط استنبات جديد: بعد إزالة وسط الاستنبات القديم، أضف كمية مناسبة من وسط الاستنبات إلى قارورة الاستنبات. أضف الوسط من الجدار الجانبي للقارورة لتجنب ملامسته المباشرة لسطح الخلايا الملتصقة. يجب تحديد كمية وسط الاستنبات الجديد المضاف بناءً على كثافة الخلايا ومعدل نموها لضمان نمو الخلايا بشكل طبيعي.
IV: جمع الخلايا
1. إزالة وسط الاستنبات القديم: اسحب وسط الاستنبات القديم برفق من قارورة استنبات الخلايا، ثم أضف كمية مناسبة من محلول الفوسفات الملحي (PBS)، ورجّ القارورة برفق لإزالة أي بقايا من وسط الاستنبات، مع التأكد من نظافة سطح الخلايا.
2. هضم الخلايا وإيقاف عملية الهضم: أضف كمية مناسبة من التربسين (≥3 مل) لمدة 2-3 دقائق لهضم الخلايا. أوقف عملية الهضم بإضافة وسط استنبات يحتوي على المصل.
3. جمع الخلايا: استخدم ماصة لنقل معلق الخلايا إلى أنبوب طرد مركزي (مع تجنب تكوّن الرغوة)، ثم ضعه في جهاز الطرد المركزي، وقم بالطرد المركزي بسرعة مناسبة (مثلاً 800 دورة في الدقيقة) لمدة 5 دقائق للسماح للخلايا بالترسب في قاع الأنبوب.
4. جمع راسب الخلايا: بعد الطرد المركزي، تخلص برفق من السائل الطافي من أنبوب الطرد المركزي (لا تتخلص من راسب الخلايا). قم بجمع كريات الخلايا من أنبوب الطرد المركزي وتابع المعالجة الإضافية حسب الحاجة للتجربة.